方法有很多，我说一个在R里操作的办法吧。   1. 首先先使用Bioconductor安装GenomicRange包以及对应物种的BSgenome包，比如你这里应该是拟南芥。   2. 然后把你的区间，构建成GRange对象   3. 直接使用getSeq提取序列   [code]> library(BSgenome.Athaliana.TAIR.TAIR9) > library(GenomicRanges) > input_range = GRanges(seqnames = c("Chr1","Chr1"), + ranges = IRanges(start = c(28552,78931),end = c(28655,79030)), + id = c("ath-MIR838","ath-MIR165a"), + strand = c("+","-")) > input_range GRanges object with 2 ranges and 1 metadata column: seqnames ranges strand | id | [1] Chr1 [28552, 28655] + | ath-MIR838 [2] Chr1 [78931, 79030] - | ath-MIR165a ------- seqinfo: 1 sequence from an unspecified genome; no seqlengths > getSeq(BSgenome.Athaliana.TAIR.TAIR9,input_range) A DNAStringSet instance of length 2 width seq [1] 104 GTGCAAGAAGGAGAAGCAAAGTCTGTCTATGTATTATGAGATAGCTACTTCTATGGCTAGGATATATGTTGTACAAGACCGGCTTTTCTTCTACTTCTTGCACA [2] 100 GGAATGTTGTCTGGATCGAGGATATTATAGATATATACATGTGTATGTTAATGATTCAAGTGATCATAGAGAGTATCCTCGGACCAGGCTTCATCCCCCC[/code]    

制作成bed文件，用bedtools的getfasta即可。 楼主你的文件应该就是bed格式了。改个bed后缀直接用就行。