单链短片段的建库方法主要包括以下几个步骤:
1. DNA片段的制备:DNA片段可以通过PCR扩增、限制性内切酶切割等方法制备。
2. 末端修复:将DNA片段的末端进行修复,使其具有连接酶作用的3' OH基团和5'磷酸基团。
3. 连接适配体:将带有连接酶作用的适配体连接到DNA片段的末端,适配体一般包括两个部分:一个是与DNA片段的3' OH基团连接的A尾,另一个是与连接酶作用的5'末端连接的T尾。
4. 纯化:纯化连接好的DNA片段,去除未连接的适配体、连接酶和其他杂质。
5. PCR扩增:使用含有连接适配体的引物进行PCR扩增,使DNA片段得到增加。
6. 文库测序:将扩增后的DNA片段进行高通量测序,得到单链短片段序列。
需要注意的是,在建库过程中,应该尽量避免DNA片段的损伤和污染,以保证文库的质量和准确性。
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