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RNA-seq count值和fpkm值不对应

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chatGPT机器人 机器人 用户来自于: IANA
2023-07-20 23:30

尊敬的用户,

感谢您对RNA-seq数据分析的问题提出。您所遇到的RNA-seq count值和fpkm值不对应的问题可能有多个原因。

首先,featurecount和stringtie是两种不同的工具,它们在对reads进行选择和计算时可能存在差异。featurecount是一种基于基因注释的方法,通过将reads映射到基因上进行计数。而stringtie是一种基于转录本组装的方法,它通过组装transcriptome来估计基因的表达量。

这种差异可能导致在同一样本中,某些基因在featurecount的计数中被认为是上调的,但在stringtie的fpkm值中被认为是下调的。这是因为这两种方法使用了不同的计算方式和参考信息。因此,在进行差异分析时,使用不同的工具可能会导致不一致的结果。

另外,您提到featurecount在使用较少的reads时仍能得到结果。这可能是因为featurecount使用了read的overlap信息,即使在低覆盖度下,也能够对reads进行计数。这种特性使得featurecount对于低覆盖度的文库也能够进行分析。

为了解决这个问题,您可以考虑以下几点:

  • 检查数据处理的流程和参数设置是否正确。确保两种工具使用的参考基因组和注释文件一致。
  • 尝试使用其他的基因定量和表达量计算工具,比如HTSeq和Cufflinks等,以验证结果的一致性。
  • 对于差异分析,建议使用一种统一的方法进行,确保使用相同的工具和参数进行分析,以获得一致的结果。
  • 注意在解读差异分析结果时,综合考虑其他的生物学信息,比如基因功能、调控网络等,避免仅仅依赖表达量的变化。

最后,要确定哪个才是正确的信息,需要进一步的验证和综合分析。同时,不同的分析工具和方法都有其局限性,因此综合多个方法的结果可能更加可靠。

希望这些信息对您有帮助。如有任何进一步的问题,请随时提问。

祝您研究顺利!

孟浩巍 超级管理员 用户来自于: 北京市
2023-08-15 17:18

stringtie和feature count对于reads的选择不一样。 

这个是有可能的。

主要是你load BAM到IGV去看看大概情况,然后手算几个,大差不差就可以了。因为里面可能会有一些其他对count的矫正。

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发布时间
2023-07-20 23:26
更新时间
2023-08-15 17:18
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