单细胞RNA-seq(scRNA-seq)是一种新兴的高通量测序技术,可以对单个细胞的RNA转录本进行全面的分析。下面是单细胞RNA-seq分析流程及相关代码和示例。
# 质量控制
fastqc -o output_dir -t 8 raw_fastq.gz
# 去除低质量序列
cutadapt -a adapter_sequence -o output.fastq.gz input.fastq.gz
# 去除接头序列
cutadapt -u 10 -o output.fastq.gz input.fastq.gz
# 过滤低表达基因
cellranger count --id=sample --fastqs=fastq_dir --transcriptome=ref_genome --expect-cells=1000
# 对齐
STAR --genomeDir genome_dir --readFilesIn input.fastq.gz --outFileNamePrefix output_dir --outSAMtype BAM SortedByCoordinate --runThreadN 16
# 生成表达矩阵
cellranger count --id=sample --fastqs=fastq_dir --transcriptome=ref_genome --expect-cells=1000
# 标准化
scaled_data = scale(expression_matrix, center = TRUE, scale = TRUE)
# 降维
tsne_data = Rtsne::Rtsne(scaled_data, dims = 2, perplexity = 30, verbose = TRUE, max_iter = 500)
# 降维可视化
plot(tsne_data$Y, col = cell_type, pch = 20, main = "t-SNE plot")
# 细胞类型鉴定
cell_type = FindClusters(object = scaled_data, resolution = 0.6)$resolutions
# 基因差异表达分析
dds = DESeqDataSetFromMatrix(countData = count_matrix, colData = coldata, design = ~ cell_type)
dds = DESeq(dds) res = results(dds)
以上是单细胞RNA-seq分析流程及相关代码和示例。实际操作中,可能需要根据数据类型和分析目的进行调整和优化。